Люїс рпга тест

Люис рпга тест(Lyuis rpga test) інструкція з використання, дозування

• Термін придатності
• Умови відпуску

2.2. склад набору

3. застережні заходи

• при роботі зі зразками сироваток (або плазмою) крові пацієнтів слід поводитися як з потенційно інфекційними об'єктами, дотримуючись застережних заходів (сп 3.3.2.1288-03).
• не дозволяється модифікувати процедуру проведення аналізу, скорочувати тривалість часу постановки реакції, використовувати реагенти інших виробників, а також реагенти інших серій набору «люїс рпга».
• необхідно передбачити заходи щодо запобігання перехресній контамінації реагентів.
• компоненти «люїс рпга тесту» містять 0,1% азиду натрію як консервант, який може бути токсичний при потраплянні всередину.

4. обладнання й матеріали, необхідні для проведення аналізу

1. дозатори механічні зі змінними наконечниками, з діапазоном дозування рідини 10 -100 мкл, 100-1000 мкл.

2. таймер.

3. холодильник.

4. рукавички латексні.

5. зразки для аналізу

для дослідження використовують сироватку (або плазму) крові людини.

для одержання сироватки свіжовзяту кров, отриману від пацієнта, інкубують у термостаті при температурі 37 °с протягом 30-60 хв, витримують при температурі 4 °с протягом 1,5 год, після чого центрифугують протягом 10 хв зі швидкістю 1,5 тис. об/хв. не використовують зразки зі слідами бактеріального проросту, гемолізовані або хільозні.

допускається зберігання сироваток при температурі від 2 до 8 °с протягом 5 днів або при мінус 20 °с не більше 6 тижнів.

6. проведення аналізу

6.1. підготовка реагентів

всі реагенти й зразки до початку дослідження витримують протягом 30 хв при температурі від 18 до 25 °с.

перед використанням діагностикум і контрольні еритроцити (флакон 1 і флакон 2) струшують до утворення гомогенної суспензії. не допускається підсихання діагностикума й контрольних еритроцитів на стінках флаконів у процесі зберігання набору.

для постановки реакції застосовують планшети для мікротитрування з u-подібними лунками.

примітка: реакцію проводять лише на горизонтальній поверхні, не допускаючи близькості приладів, що створюють вібрацію.

6.2. проведення аналізу

увага: реакцію з к+ і к- ставлять так само, як і з досліджуваним зразком сироватки крові.

якісний метод

1) розведення випробуваної сироватки готовлять безпосередньо в лунках планшета для мікротитрування. для цього в лунки вносять буфер для розведення (флакон 5) за такою схемою:

ряд 1 (вертикальний) 25 мкл

ряд 2 (вертикальний) 100 мкл

ряди 3 і 4 (вертикальні) 25 мкл

вносять 25 мкл сироватки, яка буде досліджуватися, в лунку ряду 1 (одержують розведення сироватки 1:2). перемішують вміст лунки ряду 1 і переносять 25 мкл у лунку ряду 2 (одержують розведення сироватки 1:10). перемішують вміст лунки ряду 2 і переносять по 25 мкл у лунку ряду 3 і в лунку ряду 4, перемішують і видаляють по 25 мкл; лунки рядів 3 і 4, що містять по 25 мкл розведення 1:20 досліджуваної сироватки, використовують для постановки реакції.

розведення сироватки 1:20 можна приготувати в лунці ряду 1. для цього до 190 мкл буфера для розведення (флакон 5) додають 10 мкл сироватки, перемішують, після чого із цієї лунки відбирають по 25 мкл і переносять у лунки рядів 2 і 3. у цьому випадку для постановки реакції використовують лунки 2 і 3 рядів, що містять по 25 мкл розведення досліджуваної сироватки 1:20.

розведення вихідних сироваток 1:20 допускається робити в мікропробірках, наприклад, додати 10 мкл сироватки до 190 мкл буфера для розведення (флакон 5) і перемішати. для постановки реакції у дві лунки планшета для мікротитрування вносять по 25 мкл приготовленого розведення досліджуваної сироватки.

2) додають по 75 мкл суспензії діагностикума (флакон 1) у лунки 4-го ряду й по 75 мкл суспензії контрольних еритроцитів (флакон 2) у лунки 3-го ряду. кінцеве розведення досліджуваної сироватки становить 1:80. необхідно підтримувати збереження однорідності суспензій у флаконах, із яких здійснюється розкапування. при утворенні осаду або розшаровуванні, яке намічається, ретельно перемішують вміст флакона.

3) у кожну постановку обов'язково включають позитивний контроль (к+) (флакон 3) і негативний контроль (к-) (флакон 4), що входять до складу набору. реакцію з контрольними зразками ставлять аналогічно.

4) після розкапування реагентів обережно погойдують планшет (протягом 1 хв) вручну, щоб перемішати вміст лунок. закривають планшет й інкубують його 45-60 хв при кімнатній температурі. до обліку результатів планшет повинен бути нерухомим! планшет можна залишити на ніч.

5) враховують результати аглютинації.

кількісний метод

після визначення антитіл у зразку сироватки (або плазмі) крові якісним методом на наступному етапі може бути проведений кількісний аналіз позитивних зразків. початкове розведення сироватки для кількісного визначення - 1:80. схема постановки реакції така:

1) вносять по 25 мкл буфера для розведення (флакон 5) у лунки вертикальних рядів 1-8 (кількість горизонтальних рядів повинна відповідати кількості зразків) планшета для кількісного аналізу.

2) вносять по 25 мкл буфера для розведення (флакон 5) у лунки вертикальних рядів 1-8 для титрування позитивного контролю (к+) (флакон 3).

3) вносять по 25 мкл буфера для розведення (флакон 3) у дві лунки планшета для постановки реакції з негативним контролем (к-) (флакон 4).

4) вносять по 25 мкл зразка з відповідної лунки ряду 2 (розведення сироватки 1:10) планшета, який був використаний для постановки якісного методу, у лунку вертикального ряду 1 і 2 планшета, який використовувався для кількісного методу, перемішують вміст лунок. із лунки 1 видаляють 25 мкл.

5) із лунки вертикального ряду 2 після перемішування вмісту переносять 25 мкл у лунку 3. готують послідовні дворазові розведення зразка в лунках рядів 3-8 (розведення зразків сироватки від 1:20 до 1:1280). із останньої лунки (ряд 8) відбирають надлишкові 25 мкл і видаляють.

6) для постановки реакції з негативним контролем у дві лунки, що містять по 25 мкл буфера для розведення (див. п. 1), додають по 25 мкл розведення к- 1:10, перемішують і видаляють по 25 мкл.

7) вносять по 75 мкл контрольних еритроцитів (флакон 2) у лунки вертикального ряду 1 і в одну з лунок з к- (кінцеве розведення досліджуваної сироватки - 1:80).

8) вносять по 75 мкл діагностикума (флакон 1) у лунки рядів 2-8, а також у другу лунку з негативним контролем. кінцеві розведення досліджуваних зразків сироватки (або плазми) крові й к+ від 1:80 до 1:5120.

9) перемішують вміст лунок планшета обережним погойдуванням протягом 1 хв вручну. закривають кришкою й залишають на 45-60 хв при температурі від 18 до 25 °с. до обліку результатів планшет повинен бути нерухомим! планшет можна залишити на ніч.

10) враховують результати реакції.

7. реєстрація й інтерпретація результатів

7.1. загальні відомості при обліку результатів.

1) облік результатів здійснюють візуально за такою шкалою:

4+ - рівний шар аглютинованих еритроцитів по всій поверхні дна лунки («парасолька»), іноді зі складчастим краєм;

3+ - те саме, що й 4+, але з наміченим кільцем по периферії «парасольки»;

2+ - еритроцити утворюють широке кільце з вираженим просвітом в центрі;

1+ - еритроцити утворюють більш щільне кільце меншого розміру з невеликим просвітом у центрі;

± - компактний осад еритроцитів зі слабко помітним просвітом в центрі;

• - компактний осад еритроцитів у центрі лунки («ґудзичок»).

примітка:

1) слід звертати увагу на можливий нестандартний вид реакції. загнуті або нерівні краї «парасольки» можуть бути результатом надлишку антитіл (ефект «прозони»).

2) у лунках з позитивним і негативним контролем, а також у лунках з досліджуваними зразками, при додаванні контрольних еритроцитів аглютинація повинна бути відсутня.

3) у лунках з негативним контролем і діагностикумом аглютинація повинна бути відсутня.

4) аглютинація еритроцитів діагностикума за відсутності аглютинації контрольних еритроцитів свідчить про наявність у сироватці крові специфічних антитіл до treponema pallidum. зчитування результатів і їхню інтерпретацію здійснюють у порівнянні з контролями.

5) аглютинація контрольних еритроцитів і аглютинація діагностикума при тестуванні проби свідчать про наявність антиеритроцитарних антитіл. у цьому випадку тест повторюють. якщо при повторній постановці реакції з цією пробою знову спостерігають аглютинацію не лише діагностикума, але й контрольних еритроцитів, то тест проводять після абсорбції досліджуваної сироватки. для цього до 10 мкл вихідної досліджуваної сироватки додають 190 мкл контрольних еритроцитів (флакон 2), перемішують й інкубують при кімнатній температурі протягом 30 хв. центрифугують 3 хв при 2000 об/хв. супернатант (розведення сироватки 1:20) використовують для постановки реакції із суспензією діагностикума й контрольних еритроцитів за стандартним протоколом (25 мкл супернатанта змішують із 75 мкл діагностикума, а 25 мкл супернатанта - з 75 мкл контрольних еритроцитів).

7.2. інтерпретація результатів при якісному методі.

позитивними вважаються зразки, що реагують на 4+ і 3+;

слабопозитивними вважаються зразки, що реагують на 2+;

сумнівними вважаються зразки, що реагують на 1+;

негативними вважаються зразки, що реагують на ± і -.

при постановці реакції якісним методом у разі отримання слабопозитивних і/або сумнівних результатів рекомендується протестувати зразок повторно. при одержанні аналогічного результату рекомендується через деякий час повторне взяття крові й проведення повторного аналізу.

примітка: всі проби, що дають слабопозитивні й сумнівні результати, рекомендується додатково досліджувати іншими методами.

7.3. інтерпретація результатів при кількісному методі.

при кількісному методі постановки реакції титром позитивної сироватки вважається максимальне розведення, яке дає результат «1+». при кількісному методі в позитивному контролі (к+) (флакон 3) повинні визначатися антитіла до treponema pallidum у титрі не нижче 1: 1280.

8. умови зберігання та експлуатації набору

зберігання відповідно до сп 3.3.2.1248-03 при температурі від 2 до 8 °с у недоступному для дітей місці. зберігати тільки вертикально.

транспортування відповідно до сп 3.3.2.1248-03 при температурі від 2 до 8 °с в умовах, що виключають заморожування. допускається короткочасне (не більше 3 діб) транспортування при температурі від 9 до 25 °с.

термін придатності

• 18 місяців. препарат з терміном придатності, що закінчився, застосуванню не підлягає.

умови відпуску

для діагностики in vitro в лікувально-профілактичних та санітарно-протиепідемічних установах.

рекламації на специфічні й фізичні властивості компонентів набору

направляти на адресу підприємства-виробника:

тов «ніармедик плюс» росія , 125047, м. москва, вул. 4-та тверська-ямська, буд. 2/11, корпус 2, тел./факс (495) 741-49-89, а також на адресу фду «цндкві росмедтехнологій», 107076, м. москва, вул. короленко, буд. 3, корпус 6, тел. (495) 964-26-20, факс (495) 963-85-60.